Мобилна фаза је еквивалентна течној фази крви, и постоје разне ствари на које треба обратити пажњу током употребе. Међу њима постоје неке „замке“ на које треба обратити пажњу.
01. Измерити пХ мобилне фазе након додавања органског растварача
Ако мерите пХ са органским додатком, пХ који добијете биће другачији него пре додавања органског растварача. Ипак, најважније је бити доследан. Ако увек мерите пХ након додавања органског растварача, обавезно наведите своје кораке у методи коју користите како би други следили исти метод. Овај метод није 100% тачан, али ће барем задржати метод доследним. Ово може бити важније од добијања тачне пХ вредности.
02. Није коришћен пуфер
Сврха пуфера је да контролише пХ и спречи његову промену. Многе друге методе мењају пХ мобилне фазе, што може изазвати промене у времену задржавања, облику врха и вршном одговору.
Мравља киселина, ТФА, итд. нису пуфери
03. Не користите пуфер унутар нормалног пХ опсега
Сваки пуфер има ширину опсега од 2 пХ јединице, унутар које обезбеђује најбољу пХ стабилност. Пуфери изван овог прозора неће пружити ефективну отпорност на промене пХ вредности. Или користите пуфер у исправном опсегу, или изаберите пуфер који покрива пХ опсег који вам је потребан.
04. Додати пуфер у органски раствор
Мешање пуферског раствора са органском фазом ће највероватније изазвати таложење пуфера. У многим случајевима, чак и ако је дошло до падавина, и даље је тешко открити. Не заборавите да увек додајете органски раствор у водену фазу, што може у великој мери смањити могућност таложења пуфера.
05. Помешајте градијент концентрације од 0% помоћу пумпе
Пумпе које су данас доступне могу ефикасно мешати мобилне фазе и дегасити у линији, али неће сви који користе вашу методу имати пумпу високог квалитета. Помешајте А и Б у један раствор и покрените га 100% инлине.
На пример, 950 мл органске почетне смеше може се припремити мешањем са 50 мл воде. Предност овога је што може смањити варијабилност између ХПЛЦ-а и смањити могућност појаве мехурића и падавина у систему. Вреди напоменути да је однос мешавине пумпе 95:5, што не значи да је претходно помешано време задржавања у боци такође 95:5.
06. Не користите исправну модификовану киселину (базу) за промену пуфера
Користите само киселину или базу која формира пуферску со коју користите. На пример, натријум-фосфатни пуфер треба припремити само са фосфорном киселином или натријум хидроксидом.
07. Ненавођење свих информација о баферу у методи, као што је додавање 5г офнатријум фосфат у 1000 мл воде.
Тип пуфера одређује пХ опсег који се може пуферовати. Потребна концентрација одређује јачину пуфера. 5 грама или анхидрованог натријум фосфата и 5 грама мононатријум фосфата монохидрата имају различите јачине пуфера.
08. Додавање органских растварача пре провере
Ако је претходни метод користио пуферски раствор за основну линију Б, а ваш метод користи органски раствор за основну линију Б, надамо се да можете да сместите пуфер у цеви пумпе и главу пумпе.
09. Подигните боцу и испразните последњу кап
Постоји велика шанса да нећете имати довољно мобилне фазе да завршите цео циклус и да ће ваш узорак задимити. Поред могућности прегоревања система пумпе и колоне, мобилна фаза ће потпуно испарити и мобилна фаза на врху боце ће се променити.
10. Користите ултразвучну мобилну фазу за дегазацију
Најважније је осигурати да су све пуферске соли растворене, али ово је најгори начин за дегазирање и брзо ће загрејати мобилну фазу, узрокујући испаравање органских компоненти. Да бисте касније уштедели непотребне проблеме, одвојите пет минута да усисавате своју мобилну фазу.
Време поста: 27.08.2024